全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行。
1.首先制備組織單細胞懸液，制備方法詳見“組織單細胞懸液制備技術”。
2.取一支15ml離心管，加入與組織單細胞懸液等量的分離液（注：分離液zui少不得少于
3ml）。
3.用吸管小心吸取組織單細胞懸液加于分離液液面上，400-500g，離心20-30min。（注：
根據(jù)組織單細胞懸液量確定離心條件，組織單細胞懸液量越大，離心力越大，離心時間
越長，具體離心條件需客戶自行摸索，以達到分離效果）。
4.離心后，此時離心管中由上至下分為四層。*層為稀釋液層。第二層為環(huán)狀乳白色單
個核細胞層。第三層為透明分離液層。第四層為紅細胞層。
5.用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色單個核細胞層到另一15ml離心管中，向離心管中加
入10ml清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118），混勻細胞。
6. 250g，離心10min。
7.棄上清。
8.用吸管以5ml清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118）重懸所得細胞。
9. 250g，離心10min。
10.重復
7、8、9，棄上清后以 0.5ml后續(xù)實驗所需相應液體重懸細胞。
【注意事項】
1.全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在20±2℃的條件下進行。為獲得的實驗結(jié)果，zui
好在取樣2h內(nèi)進行實驗，樣品存放時間越長，細胞分離效果越差。樣品放置超過 6h后
分離效果更差甚至不能達到分離目的。
2.本實驗不要使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品，應使用無靜電、低靜電離
心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品，因為靜電作用將導致細胞貼壁、堿處理的玻璃表面
會變成毛面，影響細胞分離效果。
3.吸取過多的單個核細胞層及分離液層會導致分離液交界處的粒細胞被吸出從而使混雜的
粒細胞數(shù)量增加。
4.分離液用量大于組織單細胞懸液樣本時，分離效果更佳。
5.如實驗后細胞得率或活性過低，請上海研謹以尋求幫助。
【儲存條件及有效期】
18-25℃保存，有效期 2年。本品易感染細菌，需無菌條件操作。無菌條件下操作，啟
封后置常溫保存。如4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果。
【參考值（參考范圍）】
本實驗淋巴細胞提取率及純度大于 80%。
【相關實驗技術方案】
1.組織單細胞懸液制備技術。
2.所獲得淋巴細胞的培養(yǎng)技術。
3.所獲得淋巴細胞的核酸提取技術。
4.所獲得淋巴細胞的鑒定方法
A.流式細胞技術
B.免疫組化技術
C.原位雜交技術
D.PCR技術
注：上述技術方案詳情請登陸上海研謹生物科技公司搜索“細胞分離、
純化、擴增、鑒定及生物治療技術手冊”，并在說明書項目欄下下載使用。
【可能存在的問題及解決方法】
1.由于血液粘度、細胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示：
出現(xiàn)情況
出現(xiàn)原因
建議解決方案
離心后目的細胞存在于血漿層或稀釋液層
轉(zhuǎn)速過小或離心時間過短
適當增減轉(zhuǎn)速
離心后目的細胞存在于分離液中
轉(zhuǎn)速過大或離心時間過長
適當增減轉(zhuǎn)速
離心后白環(huán)層彌散
細胞密度過大
調(diào)整細胞密度
離心后白環(huán)層太淺或看不見
細胞密度過小
調(diào)整細胞密度
2.本分離液分離細胞的原理為密度梯度離心，其密度與溫度、大氣壓等密切相關。不同地
區(qū)客戶可根據(jù)當?shù)厍闆r對離心條件進行適當調(diào)整。建議對離心條件進行調(diào)整時，恒定離
心時間，對離心轉(zhuǎn)速進行調(diào)整。
3.本分離液依照標準，全部使用藥用級原料，性能指標與國產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同，可
能出現(xiàn)紅細胞沉降不*的情況，可以適當加大離心轉(zhuǎn)速。
注：在對離心條件進行調(diào)整時，離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g為基數(shù)，直至達到分離效果，
離心力zui小不得小于 400g，zui大不得大于 1200g。離心時間以 20-30min為準。
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